Расшифровка ПЦР и биохимического анализа на гепатит

ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования с помощью полимеразной цепной реакции. Исследование обладает высокой специфичностью, точностью, и позволяет не только определить наличие или отсутствие вируса, но и его концентрацию и генотип.

Расшифровка ПЦР и биохимического анализа на гепатит
ПЦР анализ

Для исследования берут кровь пациента, в которой потенциально может находиться РНК вируса. В кровь добавляют праймеры — искусственно синтезированные участки искомого гена малой длины, и РНК-полимеразу — специальный фермент, который многократно увеличивает количество генетического материала возбудителя.

С помощью специального аппарата проводят несколько циклов нагревания и охлаждения. Затем материал анализируют и сопоставляют с известными генами вируса, на основе чего делают заключение о наличии или отсутствии заражения.

Виды исследования

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

  1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
  2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.

Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Количественный ПЦР

Количественный метод определяет количество генома ВГВ
Количественный ПЦР предполагает одновременное создание копий фрагментов ДНК и определение количества молекул. Измерение проводится после каждого этапа, то есть в режиме реального времени. Это достигается при помощи флюоресцентных зондов, которые включаются в цепочку молекул и светятся в определенный период исследования.

Данный способ применяют для обнаружения фрагментов ДНК, которые являются маркерами вируса гепатита. С помощью количественного метода удается точно выделить генотип вируса. Другими словами, подсчитывают количество копий генома ВГВ на количество клеток больного.

Количественный анализ дает ответы на следующие вопросы:

  1. С какой интенсивностью прогрессирует болезнь.
  2. Насколько эффективно проводимое лечение.
  3. Развилась ли резистентность к назначенным препаратам.

Также количественное измерение необходимо для диагностики хронической стадии инфекции. Если количество ДНК ниже 100 шт/мл при нормальном уровне трансаминаза, то человек является носителем вируса.

При острой фазе количество антител значительно выше.При антивирусной терапии повышение количества антител свидетельствует о развившейся устойчивости к лекарствам, это является сигналом для корректировки лечения.

Качественный ПЦР на гепатит С

В большинстве случаев, качественный ПЦР назначается при выявлении в организме пациента антител к гепатиту С. Полимеразная реакция при подозрении на гепатит С проводится по следующему принципу.

Первое тестирование — на четвертую неделю после обнаружения антител. Второе — на двенадцатую неделю, третье — на двадцать четвертую. Далее анализ назначается на постоянной основе, один раз каждые 12 месяцев.

Проведение полимеразной реакции на гепатит Б, А, Ц позволяет получить максимально точные результаты за счет высокой чувствительности теста от 10 до 500 МЕ/мл. Это дает возможность определять наиболее низкие показатели присутствия в организме вируса и контролировать его дальнейшее развитие.

Расшифровка результатов проводится лечащим врачом. Положительный анализ говорить о наличии патогенного микрорганизма. Отрицательный — чаще об отсутствии, но на 100% не исключает НСV.

Взятие анализа на проведение ПЦР НСV проводится в утреннее время, биологическим материалом является венозная кровь.

Иммунологическое исследование

Для установления возможностей пациента бороться с опасным вирусом проводят диагностику уровня сопротивляемости организма. Благодаря целому комплексу лабораторных исследований устанавливают количественные и качественные показатели иммунологических факторов — антитела к гепатиту В.

Иммунологическое исследованиеБелок HBsAg — поверхностный антиген, являющийся составной частью суперкапсида (вирусной оболочки) возбудителя болезни. Основная его функция — участие в процессе адсорбции вируса здоровыми клетками печени. Пептид HBsAg устойчив к действию факторов окружающей среды — щелочи (Ph=10), 2% раствору хлорамина и фенола.

Расшифровка ПЦР и биохимического анализа на гепатит
Иммунологическое исследование

Маркер HBsAg присутствует в сыворотке крови инфицированного человека. Сразу после его появления РНК не только транслирует его синтез, но и содержит частицы сердцевинного Ar предыдущего маркера. Он является подтверждением развития активной фазы гепатита.

Наличие HBeAg у хронического больного свидетельствует о начале активной стадии инфекционного процесса.

Маркер Anti-HBc содержит 2 вида антител — IgG и IgM. Это белок, специфичный к одному антигену. Острая форма заболевания характеризуется наличием Anti-HBc и IgM. Их положительное значение указывает на ранее перенесенное заболевание печени.

Выявление ДНК НВV методом ПЦР

Для выявления ДНК вируса гепатита B проводят ПЦР для подсчёта числа частичек НВV в единице объёма кровяной сыворотки. Показатель вируса гепатита считается нормальным при отсутствии двойника ДНК инфекта.

Такая диагностика имеет цель:

  1. Подсчитать число частиц вируса в единице объёма сыворотки.
  2. Подтвердить острый гепатит.
  3. Своевременно предотвратить переход недуга в хроническое состояние.
  4. Выявить носителей вируса с положительными результатами ИФА.
  5. Проследить возвращение вирусов после излечения.
  6. Принять верное решение о назначении терапии, её комбинировании или прекращении.
  7. Пройдя инкубационный период, острый гепатит даёт положительный результат при ПЦР через семь-четырнадцать дней.

Перед назначением крови на анализ, доктор выясняет у пациента анамнез:

  • вводились ли в вену наркотики;
  • вливалась ли чужая кровь или сдавалась, как донорская;
  • не было ли операций;
  • были ли кожные повреждения;
  • не было ли сомнительных половых связей;
  • были ли контакты с инфицированными гепатитом В людьми.

Похожие статьи

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Close
Close